蛍光プレートリーダーベースの生細胞解糖アッセイ
解糖系は真核細胞の重要な代謝経路で、分化、増殖、ATP産生のような生理学的なプロセスにおいて重要な役割を担っています。解糖系の変化は、がん、心血管、代謝性疾患を含む多くの疾患において重要な意味を持ちます。
pH-Xtra 解糖アッセイキットは、従来のエンドポイント解糖アッセイとは異なり、解糖で産生される乳酸塩によって主に起こる細胞外の酸性化をpHの変化として時間分解計測し、解糖系の一時的な変化と急速な応答の観察を可能にします。これらのpH計測は、低酸素に対するがんや細胞適応を含めた広範囲の生理学的および病態生理学的プロセスにおける、解糖活性の変化の役割に対する重要な洞察を提供します。
※pH-Xtraは、2018年1月にAgilent社が買収した、旧Luxcel社(アイルランド)の製品です。
特長
- 蛍光プレートリーダーベースの解糖活性の計測
- 標準的な96ウェル、384ウェルフォーマットに適合
- 容易な ”Mix-and-Measure” プロトコル
- 非破壊的・可逆的な計測
- サンプルを密封しない計測
- 他のアッセイキット (例:MitoXpress Xtra 酸素消費キット) の適用範囲で
マルチパラメータ解析が可能
 Figure 1:(A) pH-Xtraを用いて計測したA549の解糖活性。ヘキソキナーゼ阻害剤2-Deoxyglucose (2-DG) による処理は、センサーシグナル変化の減少として観察されるように、細胞外酸性化を阻害した。Oligomycin A (ミトコンドリアのATP合成阻害剤) による処理は、細胞エネルギー恒常性を維持するために、解糖によるATP 産生の増加を導く。 (B) 細胞外酸性化の変化は、pHまたは[H+]いずれのイオンスケールでも経時的に評価可能。 |
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原理
pH-Xtra試薬は、化学的に安定した不活性・水溶性・細胞不透過性のH+検出蛍光プローブです。
生物学的適用範囲(pH 6-7.5)において正のシグナル応答、すなわち、酸性化の増加により
蛍光シグナルの増加を示します。
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アプリケーション
- 生細胞における解糖系の評価
- がん細胞の代謝表現型決定
- 栄養飢餓、低酸素、薬剤、遺伝子操作等の解糖フラックスへの影響を評価
等 |
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3D培養の代謝計測 |
細胞代謝のプレートリーダーベースの計測は、浮遊培養と特異的な三次元培養システム(例:RAFT™、Mimetix®、Alvetex®)でも行うことができます。細胞の3D培養は、複雑な細胞内相互作用の開発を容易にし、in vitro と in vivo の間の生物学的システムのギャップを埋めることに役立ちます。
 Figure 2:(A) MitoXpress Xtraを用いて、A549 3D RAFT培養の酸素消費に対する薬物処理の相対的な影響を計測した。(B) pH-Xtraを用いて、HepG2 RAFT培養の細胞外酸性化速度に対する薬物処理の相対的な影響を計測した。 |
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MitoXpress XtraとpH-Xtraを組み合わせた計測 |
MitoXpress XtraとpH-Xtraの組み合わせは、細胞代謝の平衡の評価を、以降の代謝の調査のためのベースラインとして利用することを可能にします。 Figure 3 は、これらを組み合わせたアッセイが、様々な細胞種の酸素消費と解糖のバランスを調査するのに用いられた例を示します。また、多様な基質濃度が代謝のバランスをどのように調節するかを示しています。
 Figure 3:(A) MitoXpress XtraとpH-Xtraを用いた、がん細胞株の解糖とミトコンドリア呼吸を組み合わせた解析。 (B) U87MG細胞の代謝に対するグルコース濃度の影響。グルコース濃度の増加は、呼吸の減少と解糖の増加を導いた。 (Data courtesy of Dr. Karl Morten, Oxford University, UK) |
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仕様
pH-Xtra 解糖アッセイキット (型式:PH-200-4)
構成品 | 入数 | 説明 | 保存条件 | pH-Xtra Reagent | 4バイアル | pH 検出プローブ | 4℃* | pH-Xtra バッファータブレット | 4個 | 低緩衝能バッファー | 室温 | * 室温で輸送 |
※1バイアルにつき96ウェルプレート1枚分。384ウェルプレートでは1バイアルが~200ウェル分です。
※使用期限:製造より2年間
※計測には以下の機器・器具・試薬が別途必要です。
- 温度調節機能付き時間分解蛍光測定 (TRF)プレートリーダー
(励起:360~380nm / 蛍光:615nm)
推奨のプレートリーダー・計測設定 - 96ウェル / 384ウェル clear well プレート または black wall clear bottom プレート
- プレートブロックヒーター
- 0.22 μm 滅菌フィルター、pHメーター、KOH/HCI溶液 (バッファー調製用)
- コントロール溶液 (グルコースオキシダーゼ、2-Deoxyglucose 等)
pH-Xtra 解糖アッセイキット 消耗品 (別売)
製品名 | 型式 | 入数 | 保存条件 |
pH-Xtra バッファータブレット | RB-100-1 | 1本 | 室温 |
※外観及び規格は予告なく変更することがございますので予めご了承ください。
※本ページに記載の製品は、すべて研究・実験用です。
人・動物の診断あるいは治療等の臨床用途に使用することはできません。
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