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必要な最小RNA濃度/純度はどれくらいですか？
 最小RNA濃度はアッセイに依存します。 適切に設計されたオリゴと精製されたRNAを使用すると、RNAターゲットを1反応あたり5〜10コピーで検出できます。
適切な核酸の純度と測定の詳細については、MIQEガイドライン（RapiDxFire™Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix manualのセクション12.3を参照）を参照してください。 |
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臨床サンプルから分離されたRNAに対して1ステップRT-qPCRを実行するための具体的な推奨事項はありますか？
核酸（DNAまたはRNAのいずれか）は、サンプル/輸送培地に特異的な阻害剤およびRNA分解酵素のために、臨床サンプルから精製する必要がある可能性が最も高いでしょう。
たとえば、RNA精製には、最適な精製のためにsbeadex™病原体核酸精製キットをお勧めします。 |
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反応にRNase阻害剤を含める必要がありますか？
RNase阻害剤を含めるかどうかは、サンプルの種類によって異なります。 適切に処理された精製RNAは、RNase阻害剤の添加を必要としません。
必要に応じて、RiboGuardRNase阻害剤をRapiDxFireLyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックス反応ミックスに追加して、最終濃度を1U/µLにすることができます（例：0.5 µLの40U/µLRiboGuardRNase阻害剤 20 µLの反応容量）。 |
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熱活性化熱安定性逆転写酵素の活性化時間を短縮できますか？
熱活性化逆転写酵素の活性化時間を短縮することはお勧めしません。 逆転写酵素を完全に活性化するには、3分の活性化時間をお勧めします。
ただし、アッセイの最適化により、他のサーモサイクリングパラメータ、サンプルタイプ、感度要件などの他の要因に応じて、活性化時間を最低1分に短縮できる場合があります。 |
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熱安定性Taqポリメラーゼの活性化時間を短縮できますか？
はい。 |
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RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスを使用して、シングルプレックスアッセイとマルチプレックスアッセイの両方を実行できますか？
はい。 |
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RapiDxFire Lyo-Flex 1ステップRT-qPCARシステムのプライマーを設計する際に考慮すべきことは何ですか？
逆転写酵素の最適な反応温度は60〜70℃です。 設計されたプライマーは、使用する逆転写温度（60°Cを推奨）に適した融解温度（TM）を持っていることを確認することが重要です。 |
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マルチプレックスRT-qPCR反応を開発する際に特別な考慮事項はありますか（たとえば、プライマーとプローブの濃度）？
標準のqPCRプライマー設計の考慮事項を適用する必要があります。 これらには、アッセイ内およびアッセイ間のプライマーとプローブ間の融解温度（TM）の類似性、およびアッセイ間のプライマーダイマー/交差反応性の回避が含まれます。 プライマーとプローブの設計に関する考慮事項の詳細については、MIQEガイドライン（RapiDxFire™Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix manualのセクション12.3を参照）を参照してください。 |
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cDNA合成ステップを実行できる最高温度はどれくらいですか？
cDNA合成の最高温度は、使用するプライマーのTMに部分的に依存します。 他の要因には、目的のアンプリコンの長さ、および潜在的なRNA二次構造があるかどうかが含まれます。 |
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サーモサイクラーにROX™が必要な場合はどうすればよいですか？ どの機器を利用できますか？
パッシブリファレンス色素を使用するには、機器に推奨される濃度のROXを補充します。
RapiDxFireLyo-Flex1ステップRT-qPCR5XマスターミックスをApplied Biosystems ABI 7500、Thermo Fisher QuantStudio7、およびBIO-RADCFX96でテストしました。 |
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ウラシル-DNAグリコシラーゼ（UDG）を追加できますか？ ミックスにはデオキシウリジントリホスフェート（dUTP）が含まれていますか？
RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5XマスターミックスにはdUTPが含まれているため、UDGを反応ミックスに追加できます。 |
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室温でRT-qPCR反応を設定できますか？
はい。 |
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5Xマスターミックスは室温、または4℃でどれくらい安定していますか？
RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスは、4°Cで最大4週間、25°Cで最大7日間、40°Cで6〜24時間安定であることが示されています。 RapiDxFireLyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスを40°Cを超える温度で保存することはお勧めしません。 |
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sbeadex Pathogen Nucleic Acid Purification Kitはこのマスターミックスと互換性がありますか？
はい。 詳細については、当社のWebサイトでsbeadex病原体核酸精製キットを確認してください。 |
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RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスを-20°Cと氷の間で何回循環させることができますか？
-20°Cと氷の保管を10サイクル行っても、性能は変わりません。 |
※製品の外観及び規格は予告なく変更することがございますので予めご了承ください。
※本ページに記載の製品は、すべて研究・実験用です。
人・動物の診断あるいは治療等の臨床用途に使用することはできません。