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RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5x Master Mix

RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5x Master Mix

ウイルスおよび病原体を1ステップで検出、
大規模PCR検査およびポイントオブケア検査のワークフローを簡便に。

RapiDxFire™ Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mixはシングルチューブの便利なマスターミックスです。
細菌性およびウイルス性病原体の高感度かつ再現性のある検出を提供します。遺伝子特異的プライマーおよびBHQプローブを用いたマルチプレックスに最適化されています。温度安定性でグリセロールフリーのため、ハイスループットの自動化されたシステムやPOCデバイスで凍結乾燥品を利用したテストを開発する分子診断キットメーカーにとって理想的な製品です。

特長

  • 独自の熱活性化熱安定性逆転写酵素により、高温でのcDNA合成に耐性があり、従来捉えられなかったウイルスの検出を可能にします。本マスターミックスはRNAおよびDNAテンプレートを検出でき、ウイルスに加えて、バクテリアに対しても最適です。
  • マスターミックスを凍結乾燥することによって、PCRベースの病原体検査を実験室が外に持ち出すことが可能になります。
  • 本マスターミックスは、主要なPCR反応成分を含み、広いダイナミックレンジを備えているため、単一反応で複数の病原体の検出をサポートします。
  • 本マスターミックスは幅広い温度と条件で安定で、輸送、保管、自動化のセットアップをより柔軟に行うことができます。
  • 5x濃縮のため、廃棄物を減らしながら、高感度の検査を提供します。

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パフォーマンス

RT-qPCRを実験室から持ち出す
凍結乾燥互換性、シングルチューブの1-step Master Mix

ポイントオブケアにおける病原体検査を開発する際に、RapiDxFire Lyo-Flexを活用します。このMaster Mixは5倍の濃縮のため、より小さなサイズのLyobeadsの利用が可能になります。

Biosearch Technologies社では凍結乾燥専門のCROと協力し、凍結適合性を実証しました。
CROにおいて、RapiDxFire Lyo-Flexと賦活剤を使用して、Lyobeadsを準備しました。
最初に液体のマスターミックス(左図a)を使用し、次に再構成されたLyobeads(右図 b)を使用し、複数の標的を検出するための反応を実施しました。
RapiDxFire Lyo-Flexは凍結乾燥の前後で正確かつ高感度の検出を実証しました。
凍結乾燥互換性を示す図

難しいテンプレートの高感度検出
独自の熱活性化熱安定性逆転写酵素を使用

通常、複雑な二次構造を持つRNAテンプレートの場合、RT-qPCRの前に別の高温のステップ、変性前のステップと短時間の冷却ステップを必要とします。
RapiDxFire Lyo-Flexの逆転写酵素は、個別のRNA変性ステップなしで、高感度の検出が可能になります。

他の逆転写と異なり、RapiDxFire Lyo-Flexの逆転写酵素は70℃を超える温度で動作し、85℃で数分間安定です。

グラフはRotavirus type Aの例外的な検出を示しています。RapiDxFire Lyo-Flex(上図)および、競合他社B(下図)の反応にdsRNA rotavirusを直接添加し、それぞれベンダーの標準プロトコルに従い、増幅を実施しました。
難しいテンプレートでの検出を示す図

RNA標的とDNA標的の両方の高感度検出
RNA標的とDNA標的の両方の広いダイナミックレンジ

(a)SARS-CoV-2 RNA control (Twist) を10倍段階希釈し、1反応あたり1 x106-1x100コピーを使用し、UltraDx SARS-CoV-2 N1/N2/RnP アッセイ (Biosearch Technologies) を実行しました(N1/N2:FAM のデータを示しています (総反応液量 20 μL)。

(b) マウスのゲノム DNAを10倍段階希釈し、一反応あたり300,000 から 3 コピーを使用し、Isg20 アッセイを行いました(FAMのデータを示しています) (総反応液量 20uL)。

(a) SARS-CoV-2 RNA および (b) マウスのゲノムDNAアッセイのPCR効率90-110%、R2値>0.98であり、PCR基準を満たしました。
RNAとDNA両方の標的で好感度検出を示す図

反応液の室温安定性の拡張
室温で完全に組み立てられた反応混合液は最大8時間安定で、全ての標的に感度の高いCq値を提供します

ゲノムMS2 RNA (1反応あたり100 コピー, 総反応液量 20 μL) をトリプレックスで、MS2-領域特異的BHQ™ プロ―ブに固有の蛍光を割り当て、テストを実施しました。データは R6D1:FAM を示しています。
RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix 、競合他社A、競合他社B、をメーカーの推奨に従い、テストしました。Cq 値が低いほど、検出の感度が高くなります。Cq 値≥50は増幅がないことを示します。
室温で最大8時間の安定を示す図

Lyobeadsは、室温で長期間安定です
室温(25℃)で、0か月と4か月間の保管後に実証されたLyobeadの安定性

Lyobeads (ベンダーB社製) を RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix で調製し、ゲノムMS2 RNA を10倍希釈し、1反応あたり1x107-1x102コピー(総反応液量 20uL)をテストを実施しました。MS2-領域特異的 BHQ Probe にそれぞれ固有の蛍光色素を割り当てました(R6D1:FAM; R3D3:CAL Fluor Orange 560; R8D1:Quasar 705)。
(a) 0か月
(b) 4 か月における増幅曲線
R6D1:FAM をテストし、全ての標的の標準曲線で PCR効率 (90%-110%) とR2 値>0.98で、PCR基準を満たしました。
室温で長期安定性を示す図

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製品仕様

  • 濃度: 5x Master Mix
  • 保管: -20℃
  • Master mix buffer: Glycerol-free, Triton X-100 free buffer

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ご注文型式

型式 反応数 製品名
30060-1 250 RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix 1 mL
30060-2 2,500 RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix 10 mL
30060-3 25,000 RapiDxFire Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix 100 mL

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マニュアルなど

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FAQ

カテゴリ内開閉
  • 必要な最小RNA濃度/純度はどれくらいですか?

    最小RNA濃度はアッセイに依存します。 適切に設計されたオリゴと精製されたRNAを使用すると、RNAターゲットを1反応あたり5〜10コピーで検出できます。
    適切な核酸の純度と測定の詳細については、MIQEガイドライン(RapiDxFire™Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix manualのセクション12.3を参照)を参照してください。
  • 臨床サンプルから分離されたRNAに対して1ステップRT-qPCRを実行するための具体的な推奨事項はありますか?

    核酸(DNAまたはRNAのいずれか)は、サンプル/輸送培地に特異的な阻害剤およびRNA分解酵素のために、臨床サンプルから精製する必要がある可能性が最も高いでしょう。
            たとえば、RNA精製には、最適な精製のためにsbeadex™病原体核酸精製キットをお勧めします。
  • 反応にRNase阻害剤を含める必要がありますか?

    RNase阻害剤を含めるかどうかは、サンプルの種類によって異なります。 適切に処理された精製RNAは、RNase阻害剤の添加を必要としません。
    必要に応じて、RiboGuardRNase阻害剤をRapiDxFireLyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックス反応ミックスに追加して、最終濃度を1U/µLにすることができます(例:0.5 µLの40U/µLRiboGuardRNase阻害剤 20 µLの反応容量)。
  • 熱活性化熱安定性逆転写酵素の活性化時間を短縮できますか?

    熱活性化逆転写酵素の活性化時間を短縮することはお勧めしません。 逆転写酵素を完全に活性化するには、3分の活性化時間をお勧めします。
    ただし、アッセイの最適化により、他のサーモサイクリングパラメータ、サンプルタイプ、感度要件などの他の要因に応じて、活性化時間を最低1分に短縮できる場合があります。
  • 熱安定性Taqポリメラーゼの活性化時間を短縮できますか?

    はい。
  • RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスを使用して、シングルプレックスアッセイとマルチプレックスアッセイの両方を実行できますか?

    はい。
  • RapiDxFire Lyo-Flex 1ステップRT-qPCARシステムのプライマーを設計する際に考慮すべきことは何ですか?

    逆転写酵素の最適な反応温度は60〜70℃です。 設計されたプライマーは、使用する逆転写温度(60°Cを推奨)に適した融解温度(TM)を持っていることを確認することが重要です。
  • マルチプレックスRT-qPCR反応を開発する際に特別な考慮事項はありますか(たとえば、プライマーとプローブの濃度)?

    標準のqPCRプライマー設計の考慮事項を適用する必要があります。 これらには、アッセイ内およびアッセイ間のプライマーとプローブ間の融解温度(TM)の類似性、およびアッセイ間のプライマーダイマー/交差反応性の回避が含まれます。 プライマーとプローブの設計に関する考慮事項の詳細については、MIQEガイドライン(RapiDxFire™Lyo-Flex 1-Step RT-qPCR 5X Master Mix manualのセクション12.3を参照)を参照してください。
  • cDNA合成ステップを実行できる最高温度はどれくらいですか?

    cDNA合成の最高温度は、使用するプライマーのTMに部分的に依存します。 他の要因には、目的のアンプリコンの長さ、および潜在的なRNA二次構造があるかどうかが含まれます。
  • サーモサイクラーにROX™が必要な場合はどうすればよいですか? どの機器を利用できますか?

    パッシブリファレンス色素を使用するには、機器に推奨される濃度のROXを補充します。

    RapiDxFireLyo-Flex1ステップRT-qPCR5XマスターミックスをApplied Biosystems ABI 7500、Thermo Fisher QuantStudio7、およびBIO-RADCFX96でテストしました。
  • ウラシル-DNAグリコシラーゼ(UDG)を追加できますか? ミックスにはデオキシウリジントリホスフェート(dUTP)が含まれていますか?

    RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5XマスターミックスにはdUTPが含まれているため、UDGを反応ミックスに追加できます。
  • 室温でRT-qPCR反応を設定できますか?

    はい。
  • 5Xマスターミックスは室温、または4℃でどれくらい安定していますか?

    RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスは、4°Cで最大4週間、25°Cで最大7日間、40°Cで6〜24時間安定であることが示されています。 RapiDxFireLyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスを40°Cを超える温度で保存することはお勧めしません。
  • sbeadex Pathogen Nucleic Acid Purification Kitはこのマスターミックスと互換性がありますか?

    はい。 詳細については、当社のWebサイトでsbeadex病原体核酸精製キットを確認してください。
  • RapiDxFire Lyo-Flex1ステップRT-qPCR5Xマスターミックスを-20°Cと氷の間で何回循環させることができますか?

    -20°Cと氷の保管を10サイクル行っても、性能は変わりません。





※製品の外観及び規格は予告なく変更することがございますので予めご了承ください。
※本ページに記載の製品は、すべて研究・実験用です。
   人・動物の診断あるいは治療等の臨床用途に使用することはできません。

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この製品のメーカー

  • LGC Biosearch Technologies
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