Solution

XFイメージング・ノーマライゼーションシステム

複合領域・汎用

XFイメージング・ノーマライゼーションシステム

XFデータの細胞数ベースでのノーマライゼーションを容易に

BioTek 社製 Cytation 1 イメージャーと 細胞外フラックスアナライザー XFe の統合システムにより、XF のノーマライゼーション・データを自動的に創出することが可能になりました。

Cytation 1 による明視野・蛍光顕微鏡画像と細胞数計測データをWaveソフトウェア上でXF解析データと統合し、アッセイデータのノーマライゼーションを自動的に行うことができます。XFアッセイの信頼性・再現性の改善に貢献します。

特長

  • XFデータの細胞数ベースでのノーマライゼーションを自動的に実施
  • XFアッセイのプレート間・実験間・ウェル間での比較が容易に
  • 明視野画像の確認により、細胞播種の品質管理とサンプル・エラーの発見が可能
  • アッセイ結果のばらつきを改善:
    XFアッセイ解析からエラーサンプルを排除することにより、CV値を改善
  • 容易なワークフロー:
    バーコードリーダーにより、双方のデバイスからのデータをXFコントローラーで容易に統合


アジレント社Webサイトでのご紹介動画(英語|約3分)


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アッセイワークフロー



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アプリケーション事例

 核染色による細胞カウントを用いたノーマライゼーション

異なる細胞播種密度の結果をノーマライズした実例


Figure 1:in situ 核染色と in situ 細胞数カウントを用いた XFデータのノーマライゼーション事例。
SKOV3細胞は 1x104、2x104、3x104 cells/well で播種され、24時間の培養の後、XF Cell Energy Phenotype Testが行われ、その後画像解析された。A) 20μM ヘキスト33342 (終濃度2μM) を含むオリゴマイシン+FCCP (それぞれ終濃度 1.0μM、0.5μM) の添加による OCRとECARの生データ変化。B) ヘキスト33342 によって蛍光染色された核 (上) と Cytation 1 で 認識され輪郭を描かれた核 (下) の代表的な画像。C) OCRとECARは、in situ 核染色による細胞数 (平均±SD (n=4)) によってノーマライズした。

Agilent Technologies社 Technical Overgview “Methods and strategies for normalizing XF metabolic data to cellular parameters” (5991-8980EN) より引用



ノーマライゼーションがGlycolytic Rate アッセイの結果解釈に影響を与えた実例


Figure 2:XF Glycolytic Rate Assayの結果に対するデータ・ノーマライゼーションの効果。
RAW264.7細胞は、100ng/ml LPS単独、または20ng/ml IFNγ と共に存在する条件にてオーバーナイトで培養し、マクロファージ活性化における解糖活性の変化をXF Glycolytic Rate Assayによって解析した。全体的なglycoPERのカイネティクスデータならびに定常状態および補償的な解糖速度を⽐較した。A) ノーマライゼーション前、B) ノーマライゼーション後。⽰されるデータは、平均±SD、n=5 technical replicates (ns: 有意でない、*: p < 0.05、**: p < 0.005、 ***:p < 0.0005、 ****:p < 0.00005)。

Agilent Technologies社 Application Note ”XF Data Normalization by the Agilent Seahorse XF Imaging and Normalization System” (5994-0022EN) より引用



 明視野画像による細胞の品質管理

同⼀のマイクロプレート (各ウェルに同数の細胞を含む) のウェル間におけるデータのばらつきに最も共通して⾒られる原因は、細胞分布のばらつきです。XF イメージング・ノーマライゼーションシステムは、個々のウェル画像を取得・レビューするための明視野スキャン機能を提供します。Waveソフトウェアのアッセイ結果ファイル内で個々のウェル画像をレビューし、必要に応じてフラグを⽴てることができます。

細胞播種のエラーを除くことでデータのばらつきが改善された実例


Figure 3:明視野画像を使⽤したXF解析のためのエラー同定と記録。
A) A549細胞のすべてのウェルの明視野画像をWaveソフトウェアの「ウェル比較」機能を使⽤することにより⽐較した。細胞の損失が見られるウェルは、右上角に黄色フラグで⽬印をつけている。B) 異常値除外の前後の基底OCR・ECARの⽐較。各グラフの%値 は、対応する%CVsである。

Agilent Technologies社 Technical Overview "Data Quality Management using Brightfield Images with the Seahorse XF Imaging and Normalization System" (5991-9385EN) より引用

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ソフトウェア

本システムでは、Cytation 1は新しいAgilent Seahorse XF Imaging and Cell Counting ソフトウェアによって制御されます。これによりXFアッセイデータ内で明視野画像の確認およびフラグ立て、細胞カウントによるデータのノーマライズが可能になります。

XFコントローラーのWaveソフトウェア (ver2.6) 上で、XFアッセイデータと
Cytation 1 明視野・蛍光イメージング画像を容易に統合することができます。


細胞数カウントデータのヒートマップ
エラーサンプルのフラグ立て



ウェル間における細胞数のばらつきを視覚的に表現することで、プレート内での細胞播種の均一性を容易に確認することができます。
明視野画像により、不均一な細胞分布や細胞の形態異常を示すウェルを確認することが可能です。このようなウェルは外れ値の原因となり、細胞カウントだけでは判断できない可能性があります。

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システム構成

XFイメージング・ノーマライゼーションシステムのご利用には、XFe本体 (XFe 専用ソフトウェア ver. 2.6 以上・Wave デスクトップソフトウェア ver. 2.6 以上) とXFeノーマライゼーション機能、BioTek社製Cytation1 XFe専用
モデルが必要です。お持ちのコントローラーのOSにより、必要な品目が異なります。
ご不明な場合はお問い合わせください。

製品名 ご注文型式
XF ノーマライゼーション用イメージャー Cytation 1※1 CYT1AGV
Seahorse XFe24 ノーマライゼーション (Win7/32bit UPG) ※2、3 S7809B
Seahorse XFe96 ノーマライゼーション (Win7/32bit UPG) ※2、3 S7809A
Seahorse XFe24 ノーマライゼーション (Win10/64bit 用) ※3 S7808B
Seahorse XFe96 ノーマライゼーション (Win10/64bit 用) ※3 S7808A
インストール・動作確認費用(XFeノーマライゼーション用UPG) UPG_XFe

※1:プライムテック株式会社は Cytation1 XFe 専用モデル(型式CYT1AGV)の販売代理店です。
        Cytation5もご利用いただけます。ご相談ください。
※2:XFe コントローラー Windows 7、32bit をご使用の方は、Winsows 10、64bit へのアップ
        グレードが必要です。
※3:該当機種に対応するもののみご選択ください。



XFeノーマライゼーション機能 (型式:S7808A/B、S7809A/B) には、以下ハードウェア・ソフトウェアが
含まれます:
  • 外付けバーコードリーダー
  • Seahorse XF Imaging and Cell Counting Software Version 1.0
    (XFeコントローラーにインストール)

※CYT1AGVには、Gen5ソフトウェアが付属します。(XFeコントローラーにインストール)



BioTek 社製 Cytation 1イメージャーのXFe専用モデルは、x4対物レンズ、DAPIフィルター、365 nm LED (DAPI検出用) 、Gen5+ソフトウェアを搭載し、蛍光および高コントラスト明視野イメージングが容易に可能です。



※外観及び規格は予告なく変更することがございますので予めご了承ください。
※本ページに記載の製品は、すべて研究・実験用です。
   人・動物の診断あるいは治療等の臨床用途に使用することはできません。

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この製品のメーカー

  • Agilent Technologies
  • BioTek Instruments, Inc
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