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Flex-Seqサービス

Flex-Seqサービス
Flex-Seqサービスは、お客様が採取されたサンプル、もしくはご提供のDNAサンプルを用いて、LGC Biosearch Technologies社がシーケンシングによるターゲット遺伝⼦のジェノタイピングを行うサービスです。

データの正確性、再現性、完全性とともにスケーラビリティに重点を置き大規模ジェノタイピングのためのソリューションを提供し、植物・動物・養殖など生物種を問わず、お客様の育種プログラムやゲノムワイドな解析に必要なコスト・時間を削減し、ご研究の促進に貢献します。すべての⽣物種において、数百から30,000までのマーカーのシーケンシング・ジェノタイピングが可能です。

カスタムでのパネル作成のほかに、設計済みパネル(Flex-Seq industry standard 設計済みパネル)もご利用いただけます。

マーカー数が数百以下の場合、KASPジェノタイピング包括的サービスがご利用いただけます。

特長

  • 30,000マーカーまで一度に検出可能
    新規に、あるいはほかの技術で得られたデータを組み込んでパネルを設計可能です。
    どんな生物種でも設計可能です。

  • 特異性の高さ
    • ~98%のマーカーデータを取得可能
    • ~99%のオンターゲットシーケンシング率
    • 反復試験で99%の一致
    • ジェノタイピングアレイの結果と98%の一致

  • フレキシブル
    • パネルに含まれるマーカーの追加や除外が容易にできます
    • 多量のDNAは必要ありません

  • 「オールインワン」サービスパッケージ
    ご自身での試薬・装置の準備、実験操作が不要

  • 納期は約4-6週間
    すでにパネルの設計と製造が終了している場合、ラボにサンプルが到着してから約4-6週間で解析が終了します。
    新規設計の場合、パネルの設計と製造に約4-6週間を要します。

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アプリケーション

  • ゲノム選抜、親子鑑定
  • マーカー選抜、戻し交配
  • 集団遺伝学
  • ゲノム編集サイトの確認
  • 病原菌検出と解析

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技術概要

  • Flex-Seqプローブ技術
    • 高マルチプレックス解析ではマルチプレックスPCRより
      クリアでリカバリー率の高いデータが得られます。
    • チップベースのアレイ解析よりも、パネル設計に高度な柔軟性があります。

    Flex-Seqは2つのFlex-Seqプローブを用いてSNP/InDelをターゲットととします。プローブは、ターゲットSNP/InDelの両側に設計されることにより、目的のターゲットを回収する能力が高くなります。プローブがターゲットに結合すると、プローブ間の相補鎖が合成され、ターゲット領域はゲノムDNAから増幅されます。ゲノムDNAと非特異的なプローブ結合産物は除去されます。この特徴的なFlex-Seqプローブは一反応で高レベルなターゲットマルチプレックスを可能とします。

    300 bpのシーケンシングを行うので、ハプロタイピングに適しています。フェーズ化されたアレルは特に倍数体種において育種選抜効率を改善します。

  • 解析の流れ


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パフォーマンス

右図は、3つの異なるマーカー数のFlex-Seqパネルから得られたジェノタイピング結果の概要です。

0.2×以上の平均シーケンス深度を持つマーカーパネルの割合は91-98%でした(Data uniformity)。
正確なジェノタイピングに十分なシーケンス深度(すなわちハプロイドゲノムあたり10×)をもつマーカーの割合は92-98%でした(Markers Recovered)。
アラインメントされたシーケンスデータの95-99%が意図したターゲットにマッピングされました(Sequencing Reads on Target)。

高いマーカー回収率、データの均一性、反応の特異性の組み合わせにより、あらゆるマーカーパネルのジェノタイピング結果の効率性と全体的な完全性が保証されます。



  • 均一なシーケンス深度
    ほとんどのマーカーでの均一なシーケンス深度が得られるので、数千のサンプルの効率的なマルチプレックスシーケンスが可能になります。

    これらの効率は、新しいマーカーパネルのデザインでも再現でき、ゲノム全体の数千のマーカーをカスタマイズしてターゲットにすることができます。


  • 高い再現性
    3つの異なるマーカーパネルを使用したテクニカルレプリケート間でのマーカーごとのリード生成割合は高い相関性を示しました。
    Flex-Seqは、独立したサンプル反応からマーカー回収率およびマーカーごとのデータ量において高い一貫性を実証しています。高い再現性は、サンプルからサンプルへのマーカーの回収をより予測しやすくし、追加データ解析の容易さと最終結果の完全性を向上させます。


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サービスご利用の流れ

フローイメージアイコン
【 サンプル採取 】
イメージ写真 植物・養殖サンプルの場合、サンプル数に応じた数量のサンプル採取キットをご提供いたします。 サンプル採取キットの詳細についてはこちらをご覧ください。 家畜サンプルの場合、頬スワブ、血液、耳パンチサンプルをご用意ください。それ以外のサンプルの場合はご相談ください。
イメージ写真【 DNA抽出作業 】
LGC Biosearch Technologies社のラボにて、お客様からご提供いただくサンプルから DNA抽出用試薬および装置を用いてDNAを抽出します。
【 アッセイデザイン 】
お客様から提供されたシーケンス情報(リファレンスゲノムへのリンク、および各ターゲットの位置を含むBEDファイル)に基づき、 NGSプローブパネルのデザインを行います。
提出していただくシーケンス情報の詳細についてはこちらPDFドキュメントアイコンのリンクよりご確認ください。
【 アッセイの実行 】
Flex-Seqシーケンシングライブラリの準備後、NGSを行います。
【 データの納品 】
スコアリングされたジェノタイピングデータ、多型データ(VCFファイル)および生シーケンスデータ(FASTQフォーマット)をご提供します。

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Flex-Seq industry standard 設計済みパネル

Flex-Seq industry standard設計済みパネルは、十分に特徴づけられた業界標準のコンテンツを用いて設計されており、低価格で迅速な納期が可能です。また、マーカー密度の変更やマーカーの追加・削除など、研究内容によりパネルを簡単かつ安価に調整し、育種プログラムに理想的なパネルを柔軟かつコスト効率よく設計することも可能です。

  • 特徴づけられた標準コンテンツに基づいて設計
  • ニーズに合わせてカスタマイズも可能
  • 設計済みパネルは順次追加予定

パネルリスト

動物
ニワトリ:Poultry 3K
ニワトリ:Poultry 25K
ブタ:Porcine 3K
ウシ:Bovine 7K
ウシ:Bovine 24K

植物
ブルーベリー:Blueberry 22K クランベリー:Cranberry 17K アサ:Cannabis 12K
ラジアータパイン:Radiata Pine ダグラスファー:Douglas Fir 2.5K スコットパイン:Scotts Pine 3K
コーヒー:Coffee 2K トウモロコシ:Maize 28K イチゴ:Strawberry 3K
トウモロコシ:Maize 17K ダイズ:Soy 5.5K イワタ:Cotton 3K
ジャガイモ:Potato 22K サトウキビ:Sugarcane 17K
パネルに含まれるSNPリストのご要望がございましたら、reagents@primetech.co.jpまでご連絡ください。


パネル詳細およびパフォーマンス

  • 動物パネル

    • ゲノム上に等間隔に配置された3,005 DNA loci
    • マーカーは既知の有益なブタSNPデータから選択
    • ゲノム選抜、インピュテーション、マーカー選抜、血統分析など、日常的な育種目的のための設計


    Porcine 3Kパネルのパフォーマンス:グラフ
    ▲ Porcine 3Kパネルのパフォーマンス。均一性は98%以上、ローカスの回収率は98%以上、オンターゲットシーケンスリード率は99%であった。

    Porcine 3Kパネルの均一性:グラフ
    ▲ Porcine 3Kパネルの均一性。表示された3サンプルのプロットはいずれも比較的平坦であることから、各ターゲットは同程度のリード数を得ており、均一性は高い。


    • 畜産業界により選択された46,000 loci 以上のライブラリーより選択
    • 目的に合わせて合理化可能
    • ウシ群内でのゲノム選抜またはマーカー選抜のガイドとして24Kあるいは7Kパネルから選択可能

    Bovine 24Kパネル(Panel A)、3Kパネル(Panel B)の均一性:グラフ
    ▲ Bovine 24Kパネル(Panel A)、3Kパネル(Panel B)の均一性。24Kと7Kの両パネルは、複数のサンプル間で高い均一性を示している(サンプルごとに異なる色のデータポイントで示されるている)。


    • 16,000 loci以上のライブラリーより選択
    • 既存品種に使用可能な3,000 loci以上を含む
    • 作成されたデータがブリーダーにとって有益となるよう、養鶏業界との関連性に基づいて選択された遺伝子を含むパネル

    Poultry 3Kパネルの均一性:グラフ
    ▲Poultry 3Kパネルの均一性。複数のサンプル間で高い均一性を示している(サンプルごとに異なる色のデータポイントで示されるている)。




  • 植物パネル

    • トウモロコシゲノムの最も情報量の多い多型に焦点をあてたパネル
    • 業界で証明された多型部位から質の高いデータを生成するために選択されたコンテンツ
    • パワー、効率性、カスタマイズの容易さのバランスに優れたターゲットジェノタイピングを提供

    • 3,000 lociを含むパネル
    • 業界標準のSNPアレイ1と一致
    • WGSの結果と98%一致
    • ゲノミックセレクションやインピュテーションのための設計

    Cotton 3Kパネルの均一性:グラフ
    ▲Cotton 3Kパネルの均一性。複数のサンプル間で高い均一性を示している。
    1:Development of a 63K SNP Array for Cotton and High-Density Mapping of Intraspecific and Interspecific Populations of Gossypium spp, Amanda M Hulse-Kemp et al, G3 (Bethesda), 2015 Apr 22;5(6):1187-209.


    • ジャガイモゲノムの最も有益な多型に焦点をあてたパネル
    • パネルにはポテトウイルスY抵抗性や成熟に関するローカスが含まれる
    • パワー、効率性、カスタマイズの容易さのバランスに優れたターゲットジェノタイピングを提供


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  • LGC Genomics Limited
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